pH敏感的抗菌肽LAH4与膜相互作用的电子顺磁共振研究

盛伊娜, 王申林, 刘国全

2019, 28(11): 749-759. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.071

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多肽与膜结合过程对于包括抗菌肽抗菌在内的多种生命过程都是非常重要的。我们利用基于电子顺磁共振技术的方法以pH敏感的多肽LAH4为研究对象, 在人工磷脂膜上研究了多肽与膜的相互作用。根据标记在多肽上的氮氧自由基谱图变化, 我们研究了LAH4与不同磷脂膜结合的亲和力及动力学信息。研究发现LAH4与带负电的POPG的结合明显强于DMPC及POPC。此外, pH同样影响LAH4与膜结合的速率, 酸性条件下明显增快的结合可能是LAH4酸性条件下抗菌活性增强的原因之一。本研究的结果和方法为后续在细胞上研究抗菌肽的与膜结合及穿膜过程提供了基础。

针对脑缺血再灌注损伤设计的双功能蛋白的脑保护作用优于单功能蛋白

于快, 李茹一, 朱元军, 刘晓岩, 王银叶

2019, 28(11): 760-769. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.072

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为了验证针对缺血再灌注损伤过程所涉及的多种途径的神经保护剂优于只针对单途径的神经保护剂的设想, 本研究选择了抗凋亡蛋白Bcl-xL (B)和抗炎蛋白IL-10 (I)作为两个功能单元, 设计了双功能融合蛋白Bcl-xL-IL-10 (B-I), 并在大肠杆菌中高水平表达。通过亲和层析对三种重组蛋白的包涵体进行纯化并复性, 获得B-I、B和I纯化蛋白。得到的B-I可以在其N端的TAT肽段的引导下跨过血脑屏障, 并被caspase-1切割为两部分。B-I处理可以显著降低脑梗死体积, 优于单纯B或I处理, 与两种单功能蛋白联合处理效果相当。用B或B-I治疗可显著减少缺血再灌注诱导的神经元凋亡, 表现为凋亡率的降低和caspase-3活性的抑制。另外, 所有重组蛋白, 尤其是B-I, 显著下调脑皮层TNF-α的含量。这些结果表明:融合蛋白B-I抑制炎症和凋亡比单独抑制任何一种都具有更好的神经保护作用。本研究证明双功能融合蛋白的脑缺血保护作用优于单功能蛋白, 该结果为缺血性脑卒中的神经保护治疗药物研究提供了新的思路。

Lipocalin噬菌体文库的构建及与FcεRI-α受体结合分子的初步筛选

彭华, 马金魁, 程洁, 黄成志, 张宏斌

2019, 28(11): 770-777. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.073

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根据Lipocalin蛋白家族的基因序列设计引物, 通过PCR重叠延伸得到含随机突变蛋白的基因序列, 重组到噬菌粒载体构建随机突变Lipocalin文库。以NSF60细胞对Lipocalin文库进行差减筛选, 再用肥大细胞进行亲和筛选, 得到结合肥大细胞的Lipocalin次级文库。以FcεRI-α受体蛋白为靶分子对Lipocalin次级文库进行富集筛选, 洗脱特异性结合的噬菌体。经过3轮筛选, 从第3轮的洗脱克隆中随机挑取8个重组噬菌体克隆。ELISA法检测出3个Anticalins分子能与肥大细胞FcεRI-α受体特异性结合。这为研发肥大细胞FcεRI-α受体阻断药物提供了生物类候选分子, 也为IgE相关的变态反应疾病的生物类小分子药物研发奠定了基础。

阿帕替尼通过促进Fas向脂筏内聚集诱导乳腺癌细胞凋亡

闫顺朝, 焦昕, 李娜, 杜扬帆, 姜程遥

2019, 28(11): 778-785. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.074

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阿帕替尼是一种口服的抗肿瘤药物, 其在很多肿瘤中均有活性, 但其抗肿瘤的作用机制复杂, 至今不清, 本研究拟评估其在乳腺癌中的作用, 并探索可能的机制。本研究利用CCK-8方法检测细胞的活力, 流式细胞术检测细胞的凋亡, Western Blot方法检测PARP, caspase-8的表达, 免疫荧光检测脂筏的聚集情况。研究结果显示, 阿帕替尼可以剂量依赖的方式抑制乳腺癌细胞增殖。进一步研究发现阿帕替尼可促进脂筏的聚集和Fas向脂筏内分重新分布, 脂筏抑制剂预处理后抑制了Fas向脂筏内的分布和阿帕替尼诱导的凋亡。总之, 我们的研究结果首次证实阿帕替尼可通过促进死亡受体Fas向脂筏内的聚集诱导乳腺癌细胞凋亡。

茚[1, 2-b]并吲哚衍生物的合成、双重抑制拓扑异构酶I和II及逆转多重耐药等生物活性研究

卢东渤, 陈宇, 刘姗, 郭超, 李霞, 李中军, 孟祥豹

2019, 28(11): 786-801. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.075

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拓扑异构酶I和拓扑异构酶II 双重抑制剂因为具有双靶点, 在提高抗增值活性的同时可以降低毒副作用。作者设计并合成了28个茚[1, 2-b]并吲哚衍生物类新型拓扑异构酶I和II抑制剂, 并发现化合物2-3j具有最强抗细胞增殖活性, 在HCT-116细胞实验中IC₅₀值为0.74 μM, 且可以诱导人直肠癌细胞凋亡。2-3j不仅对药物敏感细胞系有活性, 对于多重抗药(MDR)细胞系K562/A02, MCF-7/Adr和KB/Vcr细胞均有逆转抗药性作用, 逆转抗药性倍数变化分别为3.2, 10.1和5.8。2-3j的作用机理可能是通过抑制ABCG2活性, 提高药物细胞内浓度, 从而增强MDR细胞对传统化疗药物的敏感度。2-3j可以作为潜在的新型拓扑异构酶I & II和ABCG2抑制剂先导化合物进行进一步开发和研究。

液相色谱-串联质谱测定感染小鼠血浆中百纳培南: 方法学的建立、验证及其药物动力学研究应用

冀希炜, 康子胜, 李耘, 杨西平, 马西凤, 石崇铁, 吕媛

2019, 28(11): 802-811. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.076

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百纳培南是一类新型的广谱β-内酰胺类经肠外给药抗菌药物。本研究建立了一种简便、快速、灵敏的液质联用方法用于测定感染小鼠血浆中百纳培南的浓度。采用百纳培南氘代内标, 血浆样品经甲醇进行蛋白沉淀处理后, 采用乙腈(含0.2%甲酸)–10 mM乙酸铵溶液(含0.2%甲酸)作为流动相, 采用C₁₈反相色谱柱进行梯度洗脱分离。使用三重四级杆串联质谱, 电喷雾正离子模式、多反应监测技术进行检测。标准曲线在10~2000 ng/mL范围内线性良好(r>0.99), 定量下限为10 ng/mL, 批内及批间精密度分别<4.85%和<1.47%。百纳培南和内标的提取回收率分别为97.07%~107.09%和92.47%~111.59%。批内及批间准确度为–9.70%~–11.00%, 百纳培南和内标的基质效应分别为85.68%~92.04%和83.17%~92.04%。该方法已成功应用于百纳培南的临床前药代动力学研究。此外, 我们还建立了一个二室模型来描述百纳培南在感染小鼠体内的药物动力学行为, 以更好地了解其药动学特征。

UPLC-Q-Exactive-MS 同时测定三臣丸中六种活性成分的药代动力学研究

张玲玲, 张慧文, 武世奎, 刘宏, 李静媛, 董馨, 夏慧敏, 王焕芸

2019, 28(11): 812-824. DOI: 10.5246/jcps.2019.11.077

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建立三臣丸药代动力学的UPLC-Q-Exactive-MS检测方法, 同时测定大鼠血浆中胆酸、猪胆酸、羟基红花黄色素A、山奈酚-3-O-芸香糖苷、脱水红花黄色素B和紫丁香苷6种活性成分的含量。HPLC分离采用SHIMADZU GIST C₁₈色谱柱, 流动相为乙腈–0.1%甲酸溶液梯度洗脱。质谱检测采用HESI离子源负离子检测模式。6种活性成分的线性范围0.50–1280 ng/mL, r均大于0.99; 日内及日间精密度(RSD)均小于12.7%; 提取回收率、基质效应和稳定性的计算值均符合FDA生物分析方法验证准则。该文中的三臣丸为传统的蒙药复方, 由牛黄、红花和天竺黄三味药材等量组成。该方法为首次报道, 并且已成功应用于三臣丸的药代动力学研究。

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