HPLC法测定腺苷及其有关杂质及分析物保留行为与流动相性质关系研究

HPLC法测定腺苷及其有关杂质及分析物保留行为与流动相性质关系研究

李慧义, 周铁玲, 王静, 徐康森

1. 中国药品生物制品检定所, 北京 100050;
2. 北京医科大学, 北京 100083

收稿日期:1999-07-15 修回日期:1999-10-15 出版日期:2000-06-15 发布日期:2000-06-15

Determination of Adenosine and Related Substances by RP-HPLC and Studies on Their Retention Behavior

Li Huiyi, Zhou Tieling, Wang Jing, Xu Kangsen

1. National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing 100050;
2. School of Pharmaceutical Sciences, Beijing Medical University Beijing 100083

Received:1999-07-15 Revised:1999-10-15 Online:2000-06-15 Published:2000-06-15

摘要/Abstract

摘要： 本文建立了高效液相色谱法对腺苷及其杂质尿苷、鸟苷、胞苷和腺嘌呤进行分离分析,并用内标法测定了腺苷原料及制剂的含量。采用C18色谱柱, 0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾—甲醇(94:6)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为268 nm,对氨基苯甲酸为内标。线性范围为0.01007～0.2014 μg,相关系数r = 0.9999,最小检出限为0.2 ng,回收率为100.1%。本法简便、快速、准确、灵敏,适用于腺苷原料及制剂的质量控制和纯化过程的监测。本文还对分析物与流动相性质之间的关系进行了研究,其结果不仅有助于更好地理解反相高效液相色谱的分离机制,还有助于预测分析物的保留行为。

关键词: 腺嘌呤, 鸟苷, 胞苷, 尿苷, 高效液相色谱法

Abstract: A rapid and simple reversed-phase HPLC(RP-HPLC) method for the determination of adenosine and its related substances was developed. On an ODS column (5μm, 150mm×4.6mm), adenosine and its related substances (adenine, guanosine, cytidine and uridine) were separated by using 0.01 mol·L^-1 KH2PO4 (pH 3.7) -CH3OH (94:6) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min^-1, p-aminobenzoic acid was used as the internal standard and UV detection was performed at 260 um. The calibration curve showed good linearity over the range of 0.01007-0.2014 μg, r = 0.9999 and the detection limit was 0.2 ng (S/N ≥ 3). The recovery was 100.l% and the precision of the method was 0.5% (n = 8).
The method is accurate, sensitive and reproducible. It has been used for the quality control of adenosine and its preparations and also for monitoring the purification and refinement process of adenosine.
The relationship between retention behavior of the analytes and properties of mobile phase was also studied and discussed in this paper. The results can help to predict the chromatographic retention behavior and understand the retention mechanism better.

Key words: Adenosine, Adenine, Adenosine, Adenine, Guanosine, Cytidine, Guanosine, Cytidine, Uridine, HPLC, Uridine, HPLC

Supporting:

李慧义, 周铁玲, 王静, 徐康森. HPLC法测定腺苷及其有关杂质及分析物保留行为与流动相性质关系研究[J]. .

Li Huiyi, Zhou Tieling, Wang Jing, Xu Kangsen. Determination of Adenosine and Related Substances by RP-HPLC and Studies on Their Retention Behavior[J]. .

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