Development and validation of a rapid UPLC/MS method for the simultaneous determination of I3C, DIM, and related metabolites and its application to pharmacokinetics studies

Yury Gomez, Hu Wang, Ah-Ng Tony Kong

2016, 25(7): 477-488. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.053

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Indole-3-carbinol (I3C) and diindolylmethane (DIM) are naturally derived dietary phytochemicals with promising anti-cancer properties that have been demonstrated both in vitro and in vivo. Using reversed-phase ultra-performance liquid chromatography(UPLC) coupled with mass spectrometry (MS), a rapid, specific, and high throughput method was developed and validated for the quantification and identification of I3C, DIM, and other I3C metabolites in plasma. Samples containing I3C or DIM and the internal standard 4-methoxy indole (IS) were extracted using a liquid-liquid extraction technique. The mean recovery was 96.21% for I3C and 108.5% for DIM. Separation was achieved using a Waters Acquity UPLC HSS T3, 1.8 µm, 2.1 mm×150 mm column and acetonitrile–water gradient elution. The flow rate was 0.3 mL/min and the run time was 9 min. The limits of detection and quantification for I3C and DIM were 15 ng/mL and 25 ng/mL, respectively. Calibration curves for I3C and DIM were linear (r²>0.99) over a concentration range of 0.025–20 µg/mL. Precision, accuracy, and stability analysis fulfilled the CDER guidelines criteria. The method was successfully applied to the determination of the pharmacokinetic parameters of I3C or DIM after oral, intravenous, or intraperitoneal administration to Sprague Dawley rats. The method described here is superior over existing analytical methods for I3C and its metabolites in terms of sensitivity, speed, and separation.

抗耐药长春瑞滨脂质体及其抗耐药性乳腺癌的效应与机制研究

谢红军, 刘磊, 曾凡, 沐黎敏, 赵曜, 阎妍, 胡英杰, 吴佳栓, 卜英子, 张婧莹, 吕万良

2016, 25(7): 489-501. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.054

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在乳腺癌的综合治疗策略中, 化疗药物对于清除癌细胞起关键作用。但是, 抗癌药物的多药耐药性是化疗成功的主要障碍之一。本研究旨在构建一种抗耐药长春瑞滨脂质体并考察其抗耐药性乳腺癌的效应与机制。以耐药性人乳腺癌MCF-7/adr细胞为模型进行效应和机制研究; 将长春瑞滨包封于脂质体内核、将他莫昔芬和地喹氯铵修饰脂质体表面, 制备了抗耐药长春瑞滨脂质体, 其平均粒径约100 nm。该脂质体表现出较强的体外杀伤耐药性乳腺癌效果, 其作用机制与如下因素有关: 增加耐药性癌细胞中药物摄取; 降低耐药性癌细胞膜转运蛋白ABCB1和ABCC10的表达; 载药脂质体靶向性作用于线粒体并诱导癌细胞凋亡。诱导凋亡信号通路包括: 激活凋亡酶caspase (8, 9, 3); 诱导线粒体释放细胞色素c; 激活Bax活性并抑制Mcl-1活性; 诱导产生活性氧ROS。因此, 本研究构建了一种新的抗耐药长春瑞滨脂质体, 可望用于耐药性乳腺癌的治疗, 并为耐药性乳腺癌的治疗提供一种备选策略。

TM208治疗非小细胞肺癌移植瘤的药物动力学-药效动力学模型

花明, 冀希炜, 李润涛, 季双敏, 李健, 姚庆宇, 王丽杰, 郝方然, 卢炜, 周田彦

2016, 25(7): 502-511. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.055

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本文旨在研究一种新的抗癌化合物TM208在非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤中的治疗效果, 并建立药物动力学-药效动力学(PK-PD)模型, 描述和仿真给药之后肿瘤体积随着时间的变化情况。首先, 比较了TM208治疗组(TM208 100 mg/kg和TM208 150 mg/kg)和对照组(空白对照, 吉西他滨阳性对照)之间的肿瘤生长情况; 其次, 建立了肿瘤自然生长模型和基于空白对照以及TM208治疗组数据的PK-PD模型; 最后, 对模型进行了评价和验证并仿真不同给药方案下的药效。结果表明, NSCLC可能是TM208的一种潜在适应症, TM208 150 mg/kg QD可以作为有效剂量; 模型参数中肿瘤的初始体积为0.134 cm³, 生长速率为0.0869 day^–1; 而PK/PD模型显示药物对NSCLC细胞的直接杀伤系数为0.174 mL/μg/d, 其导致的隔室间传导速率为0.173 day^–1。不同给药方案的仿真结果表明, TM208 900 mg/kg QW与TM208 150 mg/kg QD的肿瘤抑制作用相当。总之, TM208在NSCLC移植瘤中的抗癌疗效得以证实, 所建立的PK-PD模型能定量地描述和预测血浆药物浓度和药效之间的关系, 该研究对今后TM208的转化研究具有参考作用。

药动学参数预测多西他赛血液毒性在中国早期乳腺癌患者中的应用

王芳, 陈卓, 李林, 朱明智, 熊有毅, 谷元廷

2016, 25(7): 512-516. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.056

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应用多西他赛治疗的患者中,中性粒细胞减少是主要剂量限制性毒性。本文的目的是研究在中国早期乳腺癌患者中,多西他赛药动学指标代表的药物暴露与3–4级血液毒性(中性粒细胞减少和白细胞减少)之间的关系。患者每3周注射1次多西他赛(75 mg/m², 注射时间不少于1 h)。在第一疗程中,通过测得两个时间点(注射结束时和结束后30–60分钟)患者的多西他赛血药浓度,从而计算出由药时曲线下面积(AUC)代表的药物暴露。本次共有61名患者参与该药动学研究及毒性评估,34名(55.7%)患者出现3–4级中性粒细胞减少, 30名(49.2%)患者出现3–4级白细胞减少。多西他赛浓度具有较大个体间差异(AUC分布区间1.0–6.2 mg·h/L, 变异系数为39.6%)。导致不同程度中性粒细胞减少及白细胞减少的多西他赛平均AUC值之间具有显著差异。出现低级别(0–2级)及高级别(3–4级)中性粒细胞减少的AUC平均值分别为2.0和2.8 mg·h/L (P = 0.001), 导致白细胞减少的相应AUC平均值分别为1.9和2.9 mg·h/L (P<0.0001)。个体间多西他赛药物暴露具有异变性,通过AUC可预测高级别血液毒性的发生。确定既提高疗效又限制毒性的中国乳腺癌患者的最佳多西他赛AUC值还需要更进一步的研究。

大鼠血浆中新型α7-烟碱型乙酰胆碱受体正向变构调节剂LD486的液相色谱-质谱串联测定方法学的建立及其药代动力学特征

黄晓敏, 焦文宣, 孙崎, 王克威

2016, 25(7): 517-525. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.057

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神经型α7-烟碱型乙酰胆碱受体功能的不足与认知缺陷以及多种神经精神障碍相关。在动物模型中, 激活α7-烟碱型乙酰胆碱受体可以提高学习记忆能力以及感觉门控。为了增强新型的功能, 我们通过筛选发现了激动α7-烟碱型乙酰胆碱受体的正向调节剂LD486。在本研究中, 我们建立了一个简单可靠且高效的液相色谱质谱联用的方法(LC-MS/MS)并分析了这种新型的正向变构调节剂LD486在大鼠血浆中的浓度以及药代动力学参数。含有LD486的血浆样品用反向C₁₈色谱柱分离, 流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液(80:20, v/v), 流速为0.5 mL/min, 内标为A1223。液相流出液使用电喷雾离子源(ESI, 正离子模式), 质谱多反应监测模式检测, 检测离子: LD486为m/z 419.0 [M+H]⁺→m/z 169.0, A1223为m/z 400.0 [M+H]⁺→m/z 129.9。LD486在4–4000 ng/mL范围内, 线性关系良好, 最低定量限为4 ng/mL。在最低定量限时, 依然有满意的日内日间精密度, 提取回收率, 以及基质效应。稳定性测试提示血浆中LD486在反复冻融, 22 ºC室温下放置2小时和12小时, 以及–20 ºC保存2周均保持稳定。我们将此方法成功地应用到测定大鼠血浆中LD486静脉注射(1 mg/kg)以及口服(3 mg/kg和30 mg/kg)后给药途径的药代动力学特征。

液相串联质谱法测定人血浆中选择性β2受体激动剂妥洛特罗的浓度

程龙妹, 郝光涛, 陈学义, 张应福, 张媛媛, 董瑞华, 刘泽源, 曲恒燕

2016, 25(7): 526-534. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.058

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建立一种简便、高灵敏度的液相串联质谱分析方法测定人血浆中妥洛特罗的浓度。以异丙醇–正己烷(5:95, v/v)为提取试剂, 妥洛特罗-d9为内标, 使用300 Extend C₁₈ (4.6 mm×150 mm, 5 µm)为分析柱对妥洛特罗进行分离。流动相为0.1%甲酸水(A)–乙腈(B), 等梯度洗脱, 流速为1.0 mL/min, 1:1进行分流。采用多反应监测模式, 正离子扫描对妥洛特罗进行定量分析, 妥洛特罗及内标的定量离子对分别为m/z 228.1→m/z 154.0和m/z 237.2→m/z 154.0. 血浆中妥洛特罗线性范围为0.01–5.0 ng/mL, 定量下限为0.01 ng/mL。日间精密度<3.7%, 日内精密度<11.1%。绝对回收率高于66%, 基质效应影响较小。该方法可应用于健康受试者使用妥洛特罗透皮贴剂后的药代动力学研究。

La/Gd对高磷条件下SD大鼠骨髓基质干细胞分化的不同效应

于彩霞, 龚娇, 黄健, 张天蓝, 王夔

2016, 25(7): 535-545. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.059

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镧系元素(Lns)中, 镧(La)和钆(Gd)在临床诊断和治疗中发挥着重要作用, 二者在临床中的应用会导致La和Gd 蓄积于骨骼内。La和Gd 物理化学性质相似, 当二者应用于肾功能不全患者时, 相似的性质是否会对骨代谢造成相似的生物学影响, 正在引起研究人员关注。本文比较了在高磷条件下LaCl₃和GdCl₃对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的作用, 并探讨其可能机理。结果表明, 在高磷条件下, LaCl₃高浓度抑制BMSCs分化, 低浓度能够促进分化相关基因表达; 而GdCl₃促进细胞分化, 进一步研究发现, 培养过程中生成的含Lns的钙磷酸盐沉淀参与了在本实验中观察到的La和Gd对细胞分化的不同作用。La和Gd在原子序数上存在微小差异, 致使Gd对沉淀生成的促进作用更强; 含Gd的钙磷酸盐颗粒吸附蛋白量少于含La的钙磷酸盐颗粒, 导致含Gd的颗粒粒径较大。总之, Gd与La参与的颗粒理化性质上的不同部分导致了本实验中LaCl₃和GdCl₃对细胞分化作用的不同。

Preventive effect of Peperomia pellucida (L.) Kunth herbs on ovariectomy-induced osteoporotic rats

Cynthia Astiti Putri, I Gusti Agung Ayu Kartika, I Ketut Adnyana

2016, 25(7): 546-551. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.060

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Osteoporosis is a metabolic skeletal disorder leading to bone fracture which adversely impacts the quality of life. In the present, we aimed to investigate the effect of Peperomia pellucida (L.) Kunth herb juice and ethanolic extract on ovariectomy (OVX)-induced osteoporotic rat model. Osteoporosis was induced by OVX with a double dorsolateral approach on female Wistar rats. Female Wistar rats undergoing sham surgeries (sham-control group) served as controls. The ovariectomized rats were divided into six groups based on administered treatments, (i) CMC Na 0.3% (OVX-control group), (ii) standard drug (ethynil estradiol 4.5 µg/kg), (iii) P. pellucida juice at dose of 50 mg/kg, and (iv) 100 mg/kg, (v) P. pellucida ethanolic extract at dose of 50 mg/kg, and (vi) 100 mg/kg. Treatments were started 1 week after the surgeries and lasted for 6 weeks. Rats treated with 100 mg/kgP. pellucida ethanol extract had significantly decreased serum ALP level and reduced excretion of urine calcium compared with the OVX-control group (P<0.05). These levels were not significantly altered when compared with the sham-control group (P<0.05). Furthermore, 100 mg/kg ethanolic extract-treated group showed improvement on three-dimensional image of the trabecular bone compared with the OVX-control group. Trabecular cavity formation in 100 mg/kg ethanolic extract-treated group was minimal. Ethanolic extract of Peperomia pellucida (L.) Kunthherbs at a dose of 100 mg/kg had preventive effect on OVX-induced osteoporotic rats.

我国eCTD实施策略研究——基于ICH国家经验借鉴

朱晓琳, 李斌, 杨东升, 江滨

2016, 25(7): 552-558. DOI: 10.5246/jcps.2016.07.061

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随着信息技术和制药行业的发展, eCTD逐渐成为全球药品注册申报文件的主流格式, 尤其是在ICH国家和地区。2015年, 国家食品药品监督管理总局强调了在我国建立统一的注册申请规范、全面实施CTD格式以及逐步推行eCTD电子递交的重要性。本文对ICH国家实施推行eCTD的经验进行汇总分析, 同时总结我国目前的法规实施现状。通过问卷调查, 对我国实施eCTD电子递交的可行性进行分析, 分析推行过程中可能面临的问题和挑战, 进而提出相应的政策建议。文中我国eCTD实施策略的研究成果, 可以为制药行业开展事前准备提供参考, 也可为监管机构政策制定提供依据。

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